मुख्य अंतर - उत्तरी बनाम दक्षिणी बनाम पश्चिमी सोख्ता
आणविक जीव विज्ञान में विभिन्न प्रकार के अध्ययनों के लिए डीएनए, आरएनए और प्रोटीन के विशिष्ट अनुक्रमों का पता लगाना आवश्यक है। जेल वैद्युतकणसंचलन एक ऐसी तकनीक है जो डीएनए, आरएनए और प्रोटीन को उनके आकार के अनुसार अलग करती है। जेल प्रोफाइल से, विशेष रूप से डीएनए अनुक्रम, आरएनए अनुक्रम, या प्रोटीन का पता विशेष तकनीकों द्वारा लगाया जाता है जिसे ब्लॉटिंग और लेबल वाले जांच के साथ संकरण कहा जाता है। तीन अलग-अलग प्रकार की सोख्ता विधियाँ हैं, अर्थात् दक्षिणी, उत्तरी और पश्चिमी। उत्तरी दक्षिणी और पश्चिमी सोख्ता के बीच महत्वपूर्ण अंतर यह है कि यह एक नमूने से किस प्रकार के अणु का पता लगाता है। दक्षिणी सोख्ता एक ऐसी विधि है जो डीएनए नमूने से एक विशिष्ट डीएनए अनुक्रम का पता लगाती है। उत्तरी सोख्ता एक ऐसी तकनीक है जो आरएनए नमूने से एक विशिष्ट आरएनए अनुक्रम का पता लगाती है। वेस्टर्न ब्लॉटिंग एक ऐसी विधि है जो प्रोटीन के नमूने से एक विशिष्ट प्रोटीन का पता लगाती है।
अंतर्वस्तु
1. अवलोकन और मुख्य अंतर
2. दक्षिणी सोख्ता क्या है
3. उत्तरी सोख्ता क्या है
4. वेस्टर्न ब्लॉटिंग क्या है
5. साथ-साथ तुलना - उत्तरी बनाम दक्षिणी बनाम पश्चिमी सोख्ता
6. सारांश
दक्षिणी सोख्ता क्या है?
एक डीएनए नमूने से एक विशिष्ट डीएनए अनुक्रम की पहचान के लिए 1975 में ईएम सदर्न द्वारा दक्षिणी सोख्ता तकनीक विकसित की गई थी। यह आणविक जीव विज्ञान में पेश की गई पहली सोख्ता तकनीक है। इसने डीएनए से विशिष्ट जीनों, डीएनए से विशिष्ट अंशों आदि का पता लगाने में सक्षम बनाया। दक्षिणी सोख्ता तकनीक में कई चरण शामिल हैं। वे इस प्रकार हैं।
- डीएनए को नमूने से अलग किया जाता है और प्रतिबंध एंडोन्यूक्लाइजेस के साथ पचाया जाता है ।
- डाइजेस्ट किए गए नमूने को एग्रोज जेल वैद्युतकणसंचलन द्वारा अलग किया जाता है।
- जेल में डीएनए के टुकड़े एक क्षारीय समाधान के उपयोग से एकल किस्में में विकृत हो जाते हैं।
- एकल फंसे हुए डीएनए को केशिका स्थानांतरण द्वारा नाइट्रोसेल्यूलोज फिल्टर झिल्ली में स्थानांतरित किया जाता है।
- स्थानांतरित डीएनए स्थायी रूप से झिल्ली पर तय हो गया है।
- झिल्ली पर स्थिर डीएनए को लेबल वाली जांच के साथ संकरणित किया जाता है।
- अनबाउंड डीएनए को धोने से झिल्ली से धोया जाता है।
- एक्स-रे फिल्म झिल्ली के संपर्क में आती है और एक ऑटोरेडियोग्राफ़ तैयार किया जाता है।
आणविक जीव विज्ञान के विभिन्न पहलुओं के लिए दक्षिणी सोख्ता लागू किया जाता है। यह आरएफएलपी मैपिंग , फोरेंसिक अध्ययन, जीन अभिव्यक्ति में डीएनए मिथाइलेशन, आनुवंशिक विकारों में उत्परिवर्तित जीन का पता लगाने, डीएनए फिंगरप्रिंटिंग आदि में उपयोगी है।
चित्र 01: दक्षिणी सोख्ता तकनीक
उत्तरी सोख्ता क्या है?
उत्तरी सोख्ता एक ऐसी विधि है जिसे जीन अभिव्यक्ति का अध्ययन करने के लिए एक नमूने से एक विशिष्ट आरएनए अनुक्रम या एमआरएनए अनुक्रम का पता लगाने के लिए डिज़ाइन किया गया है। इस तकनीक को 1979 में एल्विन, केम्प और स्टार्क द्वारा विकसित किया गया था। यह कई चरणों के कारण दक्षिणी और पश्चिमी सोख्ता तकनीकों से अलग है। हालांकि, इस तकनीक को जेल वैद्युतकणसंचलन, सोख्ता, और विशिष्ट लेबल जांच और पहचान के साथ संकरण के माध्यम से भी किया जाता है। उत्तरी सोख्ता तकनीक निम्नानुसार की जाती है।
- आरएनए को नमूने से निकाला जाता है और जेल वैद्युतकणसंचलन द्वारा अलग किया जाता है।
- आरएनए को जेल से एक सोख्ता झिल्ली पर स्थानांतरित किया जाता है और तय किया जाता है।
- झिल्ली को सीडीएनए या आरएनए से तैयार एक लेबल जांच के साथ इलाज किया जाता है (जांच नमूने में एक विशिष्ट अनुक्रम के लिए पूरक है)।
- जांच को एक विशिष्ट अनुक्रम के साथ बांधने के लिए झिल्ली के साथ इनक्यूबेट किया जाता है।
- अनबाउंड जांच को धोया जाता है।
- एक ऑटोरैडियोग्राफ़ द्वारा हाइब्रिडाइज्ड अंशों का पता लगाया जाता है।
नॉर्दर्न ब्लॉटिंग हाइब्रिडाइज्ड एमआरएनए का पता लगाने और मात्रा का ठहराव, आरएनए गिरावट का अध्ययन, आरएनए आधा जीवन का मूल्यांकन, आरएनए स्प्लिसिंग का पता लगाने, जीन अभिव्यक्ति का अध्ययन करने आदि में एक महत्वपूर्ण उपकरण है।
चित्र 02: उत्तरी सोख्ता
वेस्टर्न ब्लॉटिंग क्या है?
वेस्टर्न ब्लॉटिंग लेबल एंटीबॉडी के उपयोग द्वारा प्रोटीन मिश्रण से एक विशिष्ट प्रोटीन का पता लगाने की एक विधि है। इसलिए, पश्चिमी धब्बा को इम्युनोब्लॉट के रूप में भी जाना जाता है। इस तकनीक को 1979 में टोबिन एट अल द्वारा पेश किया गया था और अब इसे नियमित रूप से प्रोटीन विश्लेषण के लिए प्रयोगशालाओं में किया जाता है। चरण इस प्रकार हैं।
- नमूने से प्रोटीन निकाले जाते हैं
- पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके प्रोटीन को उनके आकार से अलग किया जाता है
- अलग किए गए अणुओं को इलेक्ट्रोपोरेशन द्वारा पीवीडीएफ झिल्ली या नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली में स्थानांतरित किया जाता है
- झिल्ली एंटीबॉडी के साथ गैर-विशिष्ट बंधन के लिए अवरुद्ध है
- स्थानांतरित प्रोटीन प्राथमिक एंटीबॉडी (एंजाइम लेबल एंटीबॉडी) से बंधे होते हैं।
- झिल्ली को विशेष रूप से बाध्य प्राथमिक एंटीबॉडी को हटाने के लिए धोया जाता है
- एक सब्सट्रेट जोड़कर और गठित रंगीन अवक्षेप का पता लगाकर बाध्य एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है
पश्चिमी सोख्ता मानव सीरम नमूने में एचआईवी-विरोधी एंटीबॉडी का पता लगाने में उपयोगी है। पश्चिमी धब्बा का उपयोग हेपेटाइटिस बी संक्रमण के लिए पुष्टिकरण परीक्षण और पागल गाय रोग के लिए निश्चित परीक्षण के रूप में भी किया जा सकता है।
चित्र 03: पश्चिमी सोख्ता
उत्तरी दक्षिणी और पश्चिमी सोख्ता में क्या अंतर है?
उत्तरी बनाम दक्षिणी बनाम पश्चिमी सोख्ता | |
| अणु के प्रकार का पता चला | |
| उत्तरी सोख्ता | उत्तरी सोख्ता एक आरएनए नमूने से एक विशिष्ट आरएनए अनुक्रम का पता लगाता है। |
| दक्षिणी सोख्ता | दक्षिणी सोख्ता डीएनए नमूने से एक विशिष्ट डीएनए अनुक्रम का पता लगाता है। |
| पश्चिमी सोख्ता | पश्चिमी सोख्ता एक प्रोटीन नमूने से एक विशिष्ट प्रोटीन का पता लगाता है। |
| जेल का प्रकार | |
| उत्तरी सोख्ता | यह Agarose/formaldehyde gel का उपयोग करता है। |
| दक्षिणी सोख्ता | यह एक Agarose जेल का उपयोग करता है। |
| पश्चिमी सोख्ता | यह Polyacrylamide gel का उपयोग करता है। |
| सोख्ता विधि | |
| उत्तरी सोख्ता | यह एक केशिका स्थानांतरण है। |
| दक्षिणी सोख्ता | यह एक केशिका स्थानांतरण है। |
| पश्चिमी सोख्ता | यह एक इलेक्ट्रिक ट्रांसफर है। |
| जांच का इस्तेमाल किया | |
| उत्तरी सोख्ता | सीडीएनए या आरएनए जांच को रेडियोधर्मी या गैर-रेडियोधर्मी रूप से लेबल किया जाता है। |
| दक्षिणी सोख्ता | डीएनए जांच को रेडियोधर्मी या गैर-रेडियोधर्मी रूप से लेबल किया जाता है। |
| पश्चिमी सोख्ता | प्राथमिक एंटीबॉडी का उपयोग जांच के रूप में किया जाता है। |
| जांच प्रणाली | |
| उत्तरी सोख्ता | यह एक ऑटोरेडियोग्राफ़, या प्रकाश या रंग परिवर्तन का पता लगाने का उपयोग करके किया जाता है। |
| दक्षिणी सोख्ता | यह एक ऑटोरेडियोग्राफ़, प्रकाश का पता लगाने या रंग परिवर्तन का उपयोग करके किया जाता है। |
| पश्चिमी सोख्ता | यह प्रकाश या रंग परिवर्तन का पता लगाने का उपयोग करके किया जाता है। |
सारांश – उत्तरी बनाम दक्षिणी बनाम पश्चिमी सोख्ता
ब्लॉटिंग नमूनों से विशिष्ट डीएनए, आरएनए या प्रोटीन की पहचान के लिए विकसित एक विशेष तकनीक है। एक विशिष्ट प्रकार के अणु का पता लगाने के लिए, तीन अलग-अलग सोख्ता प्रक्रियाएं हैं, अर्थात् उत्तरी, दक्षिणी और पश्चिमी। उत्तरी सोख्ता तकनीक को आरएनए के मिश्रण से एक विशिष्ट आरएनए अनुक्रम का पता लगाने के लिए डिज़ाइन किया गया है। दक्षिणी सोख्ता तकनीक एक डीएनए नमूने से एक विशिष्ट डीएनए अनुक्रम का पता लगाने में सक्षम बनाती है और एक प्रोटीन मिश्रण से एक विशिष्ट प्रोटीन की पहचान करने के लिए पश्चिमी सोख्ता तकनीक विकसित की जाती है।
संदर्भ
1. गिबन्स, जने। "पश्चिमी धब्बा: प्रोटीन स्थानांतरण अवलोकन।" उत्तर अमेरिकी जर्नल ऑफ मेडिकल साइंसेज। मेडनो पब्लिकेशंस एंड मीडिया प्राइवेट लिमिटेड, मार्च 2014। वेब। 27 मार्च 2017
2. ब्राउन, टी। "दक्षिणी सोख्ता।" इम्यूनोलॉजी में वर्तमान प्रोटोकॉल। यूएस नेशनल लाइब्रेरी ऑफ मेडिसिन, मई 2001। वेब। 27 मार्च 2017
3. वह, शान एल। "उत्तरी धब्बा।" एंजाइमोलॉजी में तरीके। यूएस नेशनल लाइब्रेरी ऑफ मेडिसिन, 2013. वेब। 27 मार्च 2017
छवि सौजन्य:
1. "उत्तरी धब्बा योजना" RNA405 द्वारा - कॉमन्स विकिमीडिया के माध्यम से स्वयं का कार्य (पब्लिक डोमेन)
2. "वेस्टर्न ब्लॉट 114A" अमंथबागडन द्वारा - कॉमन्स विकिमीडिया के माध्यम से खुद का काम (पब्लिक डोमेन)
